流式细胞凋亡实验步骤及结果解读❗
粉衣小女孩
2024-08-28 13:08:50
✅凋亡检测原理：在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸 (PS) 位于细胞膜内侧；细胞凋亡早期，PS 会外翻到细胞膜外侧。Annexin V (膜联蛋白 V) 是一种 Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，可与 PS 特异性结合，因此 Annexin V 常作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。7-AAD是一种核酸染料，不能通过正常质膜，随着细胞凋亡、细胞死亡过程，质膜对7-AAD的通透性增加，与细胞核中的DNA结合并发出荧光。
✅实验步骤（GOONIE试剂盒）
❶细胞加药处理48小时后收样：收集细胞上清，贴壁细胞消化后收集，用预冷PBS离心洗涤两次，弃上清
❷用预冷的双蒸水将binding buffer稀释成1×工作液，取500μL工作液重悬细胞
❸细胞悬液过滤网后转移至流式管
❹每管加入5μLAnnexin-V-AF647和5μL7-AAD，轻轻涡旋混匀后避光孵育5min
❺孵育完成后上流式细胞仪测定结果
✅ Annexin-V与7-AAD联合染色可区分早期凋亡和晚期凋亡
Annexin V-/7-AAD-：正常细胞
Annexin V+/7-AAD-：早期凋亡细胞
Annexin V+/7-AAD+：晚期凋亡细胞及坏死细胞
Annexin V-/7-AAD+：机械损伤的细胞
✅GOONIE凋亡试剂盒做出来的结果很不错，图中的结果就是我做的😌GOONIE的各种试剂盒性价比都很高，我们组很多试剂盒都用的GOONIE的，而且经常会有试用装派送到实验室😎这次的凋亡试剂盒就是领取的试用装嘿嘿😁
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