五年Transwell实验经验总结～（码住❗）

1️⃣24孔板选择：要选和小室匹配的孔板，小室要架在孔板上（如图3），才能形成有效下室；图二这种站在孔板上，会导致穿过的细胞聚在中间或边缘，不能均匀分布 2️⃣铺板：预实验摸好细胞数和时间，如果细胞对无血清很敏感，可以上室含1%血清的培基，下室20%的培基；铺板时吸二打一，垂直加到小室，挨着液面缓慢滴加 3️⃣固定染色：先将上室培基吸掉，在PBS里涮一下，甲醇固定15分钟，结晶紫染色10-30min（视情况而定）；染色结束后擦掉上室细胞，将棉签揪松，浸湿后轻轻擦掉小室内细胞（小室外膜上的细胞是穿过去的，反应细胞迁移/侵袭能力） 4️⃣拍照：小室加一点水，玻片滴一滴水，把小室放水滴上，拍出来效果很好，小室加水可以把膜压平整，玻片加水拍出来的细胞形态更好看；每个小室选五个视野拍照如图11 5️⃣结果处理：用imageJ计数，graphpad作图，t检验计算p值 ⭐经常有朋友问我用的是什么手套，是比克曼生物的，独立包装，经过了灭菌处理，可以做细胞用，弹性非常好，不容易破损，我一般一双手套用2-3天[派对R]不含滑石粉，喷酒精之后不会把培养瓶和移液枪弄脏[害羞R]