养好293T细胞是做好稳转的第一步❗

之前多次分享过稳定细胞株的构建，其实要做好稳转，养好工具细胞293T很重要，今天分享下293T细胞的培养～ 1️⃣培养条件：高糖DMEM，补充​​10%胎牛血清（FBS）或血清替代​​、​​1%双抗可加可不加（我养细胞不加双抗）；血清批次差异显著影响细胞状态，我们课题组用XR血清替代很久了，性价比高、品控稳定，细胞状态妥妥的😊[向右R]之前刷到配完全培养基时500mL培养基要不要倒出50mL后再加血清？我的方法→如果近期要用无血清培基我就倒出50mL，不用就直接往500mL加50mL血清，不用在小问题上纠结～ 2️⃣ 293T细胞贴壁性弱、生长快、易聚团​​ ▷复苏后24h内避免扰动，用DMSO冻细胞在复苏时离心去除冻存液后再转入培养瓶中 ▷293T细胞贴壁不紧，换液时一定要轻，贴着侧壁慢慢加 ▷细胞密度80-90%时进行传代，消化时可以不用pbs洗，将培基吸干后加500μL胰酶（T25），转动培养瓶使胰酶均匀分布，室温消化30S，加入完全培养基终止消化，吹打几十下就行，过度吹打可能会导致细胞聚团，1：3传代即可 ▷冻存：T25长满后冻两管，复苏一管两天长满～ ⚠️293T贴壁不紧，密度高且营养不够时很容易大片脱落，T25培养瓶可以加6-7mL培养基；从培养箱拿出细胞处理时动作要轻一点，避免液体晃动太大；包病毒时，T25长满后分成3份铺到大皿，两天刚好长到70%～