经验贴/EMT相关标志物检测❗

最近在跑EMT相关蛋白，一次就跑出来了，赶紧写了一篇经验贴，EMT理论知识总结在图2-4啦😊下面主要讲一下WB实验： 1️⃣检测哪几个指标？E-cad、N-cad是关键的标志物，所以这两个一定要检测，我看文献里一般检测2-4个标志物，所以我又加上了Vimentin和ZO1 2️⃣蛋白提取：由于E-cad、N-cad和ZO1是跨膜蛋白，蛋白变性的时候我将样品分成了两份，一份煮沸变性，一份常温变性，但跑出来结果差不多，所以跑这几个指标是可以直接煮沸变性的～ 3️⃣电泳：Zo-1的分子量比较大，我用7.5%的胶跑电泳，120V恒压跑到底（大概1h跑完），E-cad和N-cad分子量很接近，一张膜不好裁，跑两块平行胶 4️⃣转膜：对于大分子，转膜时间比较长，我更喜欢用低一点的电流转膜（200mA），200mA转2h30min可以把ZO1转得很好ദ്ദി(˵ •̀ ᴗ - ˵ ) ✧ 5️⃣一抗的选择：对于WB实验，好用的一抗很关键，之前在Abmart薅了EMT相关指标的试用装，最近正好用上了，我跑的这几个都很好发，特别是E-cad和ZO1，2-3秒就曝出来了，货号我放在图4了，稀释比例我用的都是1：1000，冲冲冲！