膜蛋白IP/co-IP实验|详细步骤➕小tips❗

IP实验步骤比较简单，但是还是有很多小细节需要注意，之前我做IP也总是会出现状况，经过摸索后现在每次IP实验都做得很好，而且我的protocol也解决了实验室几个同学的IP问题嘻嘻，分享给大家～ ✅详细步骤见图2 ✅IP/co-IP实验常见问题及解决办法见图3 ⭐有些抗体官方没有说能做IP，实际上不一定不能做，我目前遇到三个抗体都没写可以做IP，经过预实验我都做出来了，而且后续做质谱也鉴定到预期的互作蛋白，所以抗体不管写没写适用于IP都可以做个预实验看看能不能拉 ⭐膜蛋白IP实验与其他蛋白IP实验的不同主要在制样和洗脱，制样时可短暂超声，洗脱时室温变性～ ⭐针对于轻重链污染问题，选用标签抗体虽然可以避免轻重链污染，但是不适用于内源性IP实验，所以更推荐使用抗轻/重链的二抗，之前薅了一只Abmart通用型避轻/重链二抗（货号：M21008）很好用，图中的IP实验WB就是用的M21008，结果非常漂亮😄简直是国货之光！