实验入门之一抗二抗是什么❓
粉衣小女孩
2025-03-20 15:40:38
经常听到实验室的师弟师妹问为什么一抗是鼠抗二抗就要抗鼠呀?今天分享一下一抗二抗的小知识~
1️⃣一抗:能和抗原(研究的目标蛋白)特异性结合;涉及抗体我们一般会关注两个点👉🏻种属(host)和物种反应性(reactivity),用简单的话讲,Host就是指这个抗体是由什么动物产生的,reactivity是指这个抗体能和哪些物种来源的蛋白反应;选择一抗时主要考虑物种反应性和适用的实验类型
2️⃣二抗:能和抗体结合,放大一抗的信号;选择二抗时二抗的reactivity与一抗的host一致
3️⃣抗原表位是什么?👉🏻又称抗原决定簇,是由连续序列(蛋白一级结构)组成或由不连续的蛋白质三维结构组成,也是抗原-抗体结合位点;根据抗原表位中氨基酸的空间结构特点可分为线性表位和构象表位(详细见P3)
4️⃣WB、IP、IF/IHC、FC抗体的区别(详细见图4),为什么有些一抗什么实验都能做,有些一抗只能做WB实验❓👉🏻这就涉及到由于每个实验对样品蛋白的处理不同会导致抗原表位的改变,比如wb样品经过加热变性之后构象表位消失,只能用识别线性表位的一抗,IP实验是一抗结合天然蛋白,线性表位和构象表位都有,但如果线性表位在蛋白内部也无法识别
5️⃣如何选择一个适用于大多数实验的一抗呢?
比如要选择一个既可以做WB、IHC又可以做IP实验的一抗,那就要选择针对线性表位的一抗,且这个线性表位不在蛋白内部;最近【Proteintech】官网新上线的抗原3D图谱就可以看到精确的抗原表位信息,可以提高抗体相关选择的效率和准确性,避免重复购买一抗,节约时间和经费😊 除了3D表位图谱之外,Proteintech官网还改进了其免疫原信息的展示,可以根据免疫原序列选择zui合适的一抗❗
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帕帕帕
超棒