质粒图谱解读及质粒构建❗

✅质粒图谱怎么看❓ 1️⃣复制起点（Ori）：Ori表示质粒的复制起点，决定了质粒的宿主和拷贝数。原核生物DNA分子中通常只有一个复制起始点，而真核生物DNA分子有多个复制起始点。 2️⃣转录和复制方向的箭头：质粒图谱上的箭头标识了转录方向和复制起始位点的方向。转录方向由启动子开始的大箭头表示，而复制方向则指示质粒在宿主中的DNA复制方向。 3️⃣标签：包括启动子（如CMV）、抗生素抗性基因（如AmpR）、转录终止位点（如pA）、报告基因（如GFP）等。这些标签有助于了解质粒的功能和应用。 4️⃣多克隆位点（MCS）：MCS是一系列限制性内切酶酶切位点，用于插入外源DNA片段。 5️⃣外源DNA插入片段大小：质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。外源片段越长，插入难度越大，稳定性越低，转化效率也越低。 6️⃣表达系统元件：包括启动子、核糖体结合位点、克隆位点和转录终止信号。这些元件有助于区分克隆载体和表达载体，以及确定载体是否适合特定的实验目的。 7️⃣其他元件：包括增强子、沉默子、核糖体结合位点/起始密码、转录终止序列等，它们对基因的表达和调控起着重要作用。 ✅质粒构建（Vectorbuilder➕VectorBee） 1️⃣首先要根据实验需求选择合适的质粒载体，可以通过云舟生物的VectorBuilder查询，云舟生物的载体平台有多种载体可供选择，满足不同的实验需求～ 2️⃣用VectorBuilder设计质粒图谱，选好载体后添加启动子、目的基因CDS及标签就可以完成设计了，很简单，VectorBuilder中有启动子库和标签库，根据实验选择即可；根据基因名搜索目的基因，系统会推荐用哪个转录本，一个质粒就设计好啦～ 3️⃣质粒设计完成后可以下载质粒图谱，也可将后续的质粒合成及慢病毒包装交给云舟生物 4️⃣用云舟生物的免费DNA编辑软件VectorBee可查看质粒序列，包括设计引物用于后续的序列合成，页面简单好操作😊